AN3CA細(xì)胞

準(zhǔn)備工作

準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。

取材

在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時(shí)，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時(shí)應(yīng)嚴(yán)格保持無菌，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。

培養(yǎng)

將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng)，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長狀態(tài)。

正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次，觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長良好，形態(tài)是否正常，有無污染，培養(yǎng)基的PH 是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2 濃度也要定時(shí)檢查。

一般原代培養(yǎng)進(jìn)入培養(yǎng)后有一段潛伏期（數(shù)小時(shí)到數(shù)十天不等），在潛伏期細(xì)胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過了潛伏期后細(xì)胞進(jìn)入旺盛的分裂生長期。細(xì)胞長滿瓶底后要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細(xì)胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細(xì)胞一般只能傳幾十代，而轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或細(xì)胞株則可無限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可能具有惡性性質(zhì)，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。培養(yǎng)正在生長中的細(xì)胞是進(jìn)行各種生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)的良好材料。

凍存及復(fù)蘇

為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，zui終保存于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無限的。

復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。

凍存過程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時(shí)溫度、融化速度等都對(duì)細(xì)胞活力有影響。

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HS77人小細(xì)胞肺癌

HSC人雪旺細(xì)胞

HSC-T6大鼠肝星形細(xì)胞

HT-1080人纖維肉瘤

HT29人結(jié)腸癌細(xì)胞系

HuH-6人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞

HUH-7人肝癌細(xì)胞

HuT 78人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

Hut102人皮膚T細(xì)胞淋巴瘤

HUVEC- C人臍靜脈血管內(nèi)皮原代細(xì)胞

HUVEC-C人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株

IEC-18大鼠回腸細(xì)胞

IMR-32人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

INS-1大鼠胰島瘤細(xì)胞

Ishikeuva人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞

J558L鼠骨髓瘤

J82人膀胱移行細(xì)胞癌

JAR人胎盤絨毛癌細(xì)胞

JEC人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞

JEG 人絨癌細(xì)胞

JEG-3人絨毛膜癌細(xì)胞

JeKo-1人套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

Jurkat人急性T細(xì)胞白血病

Jurkat, Clone E6-1人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

K562 人慢性髓原白血病細(xì)胞

K7M2-WT小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞

KB人口腔表皮樣癌細(xì)胞

KG1a人髓系白血病細(xì)胞

KM-12人大腸癌細(xì)胞

KM202L人卵巢癌細(xì)胞

KP1人胰腺癌細(xì)胞

KP2人胰腺癌細(xì)胞

KP3人胰腺癌細(xì)胞

KP4人胰腺癌細(xì)胞

KP-N-NS人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(腦轉(zhuǎn)移)

KU812人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞

KURAMOCHI人卵巢癌細(xì)胞

kyse-140人食管癌細(xì)胞

Kyse450人食管癌細(xì)胞

KYSE-510人食管癌細(xì)胞

L Wnt-3A小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞

L-02人正常肝細(xì)胞

L1210小鼠白血病細(xì)胞

L5178Y 小鼠淋巴瘤細(xì)胞

L6大鼠成肌細(xì)胞

L6565小鼠白血病克隆細(xì)胞系

L78人肺腺鱗癌細(xì)胞

L929小鼠成纖維細(xì)胞

LAX人肺腺癌

Lec1倉鼠卵巢細(xì)胞

LECPα-1 人肺癌細(xì)胞

Lewis小鼠肺癌細(xì)胞

Li-7人肝癌細(xì)胞

LLC小鼠肺癌細(xì)胞

LLC-MK2恒河猴腎細(xì)胞

lncap人前列腺癌細(xì)胞

LNCaP clone FGC人前列腺癌細(xì)胞

LO2人正常肝細(xì)胞

LoVo人結(jié)腸癌細(xì)胞

LS-174-T人結(jié)腸腺癌細(xì)胞

LTEP-A2人肺腺癌

LX-2人肝星形細(xì)胞

MA-104恒河猴腎細(xì)胞

MC3T3-E1小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14

MC3T3-E1 Subclone 14小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14

MCF-10A人正常乳腺上皮細(xì)胞

MCF7 人乳腺癌細(xì)胞

MDA-MB-231人乳腺腺癌

MDA-MB-415人乳腺腺癌細(xì)胞

MDA-MB-435人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞

MDA-MB-435S人乳腺導(dǎo)管癌

MDA-MB-436人乳腺腺癌細(xì)胞

MDA-MB-453人乳腺癌細(xì)胞

MDA-MB-468人乳腺癌細(xì)胞

MDBK (NBL-1)牛腎細(xì)胞

MDCK狗腎細(xì)胞

MDCK(NBL-2)狗腎細(xì)胞

ME12人前列腺癌

ME-180人子宮頸表皮癌細(xì)胞

MEF小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

MFC小鼠胃癌細(xì)胞

MG-63人骨頭肉瘤細(xì)胞

MGC80-3人胃癌細(xì)胞

MHCC97-H高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞

Miapaca2人胰腺癌細(xì)胞

MKN-28人胃癌細(xì)胞

MKN-45人胃癌細(xì)胞

MLTC-1小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞

MNK-7人乳癌

MNNG/HOS Cl人骨肉瘤細(xì)胞

MOLT-4人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞

MR1中國倉鼠X小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤

MRC-5人胚肺細(xì)胞

MS1小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞

MS751人子宮頸表皮癌細(xì)胞

MSTO-211H人肺癌細(xì)胞株

Mv.1.Lu(NBL-7)貂肺上皮細(xì)胞

NAMALWA人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞

NCI-H1299人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

NCI-H1395人肺腺癌細(xì)胞

NCI-H1650人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

NCI-H1975人肺腺癌細(xì)胞

NCI-H2452人間皮瘤細(xì)胞

NCI-H292人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)

NCI-H358人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

NCI-H446人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

NCI-H460人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞

NCI-H661人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞

NCI-H716人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

NCI-N87人胃癌細(xì)胞

NCTC clone 929小鼠成纖維細(xì)胞

Neuro-2a小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞

NIH/3T3小鼠胚胎細(xì)胞

NIH-3T3-L1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(前脂肪)

NIT-1β小鼠胰島素瘤β細(xì)胞

NP69人永生化鼻咽上皮細(xì)胞系

NR8383大鼠肺泡巨噬細(xì)胞

NRC-5人胚肺

NRK大鼠腎細(xì)胞

NRK-52E大鼠腎細(xì)胞

OC3人卵巢癌細(xì)胞株

OK負(fù)鼠腎細(xì)胞

OKT 11雜交瘤細(xì)胞抗CD2

OKT 3雜交瘤(抗CD3)

OP9小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞

OS-RC-2人腎癌細(xì)胞

OV56人卵巢癌細(xì)胞

OV90人卵巢癌細(xì)胞

OVCAR3人卵巢癌細(xì)胞

OVCAR4人卵巢癌細(xì)胞

OVISE人卵巢癌細(xì)胞

OVSAHO人卵巢癌細(xì)胞

OVTOKO人卵巢癌細(xì)胞

P19小鼠畸胎瘤細(xì)胞

P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]小鼠骨髓瘤細(xì)胞

P388小鼠淋巴樣瘤

P388D1小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞

P3X63Ag8小鼠骨髓瘤細(xì)胞

P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤細(xì)胞h+急淋白血病細(xì)胞系